Флуоресцентный краситель, свободно проникающий через клеточные мембраны без использования дополнительных детергентов и концентрирующийся в органеллах с низким значением pH, например, лизосомах.
Основные характеристики красителя:
- максимум поглощения при 577 нм;
- максимум флуоресценции при 590 нм;
- поставляется в виде 1 мМ раствора в диметилсульфоксиде (ДМСО);
- рабочая концентрация 50-75 нМ (в зависимости от клеточной линии может потребоваться увеличить концентрацию).
Особенности красителя:
В структуру молекулы LumiTracker Lyso Green входит бордипиррометен (BDP), что придает ей выраженные гидрофобные свойства и обеспечивает хорошую проникающую способность через мембрану клетки. Кроме этого, краситель содержит в своей структуре аминогруппу, которая выступает в роли слабого основания. В нейтральной среде она не полностью протонирована, и молекула красителя остается относительно нейтральной, что способствует лучшему проникновению через клеточную мембрану. Предположительно, попадая в лизосомы с кислой средой, краситель протонируется и таким образом удерживается в составе органеллы с низким значением pH. Проникновение красителя в клетки происходит очень быстро, кроме этого, протонирование красителя способствует локальному защелачиванию, поэтому окрашивание живых клеток рекомендуется проводить не более 7 минут непосредственно перед визуализацией. Возможно фиксировать клетки после окрашивания, однако возрастает уровень неспецифического сигнала.
Рекомендации по применению красителя:
Окрашивание проводится в течение 3-7 минут при + 37 °C в 1x растворе PBS (непосредственно перед визуализацией, отдельным этапом при совместном окрашивании).
В зависимости от клеточной линии может потребоваться увеличить концентрацию и (или) время окрашивания.
Условия и срок хранения: 12 месяцев (с момента доставки) при − 20 °C в темноте; транспортировка до трех недель при комнатной температуре; беречь от влаги; избегать хранения на свету и излишних циклов заморозки-разморозки; при возможности хранить в аликвотах для однократного использования.