ДНК-полимераза Phusion U Hot Start – новая термостабильная ДНК-полимераза, полученная генно-инженерным путём. Благодаря внесению модификации в дНТФ-связывающий карман полимеразы Phusion было снято ограничение, характерное для высокоточных полимераз – неспособность встраивать дезоксиурацилтрифосфат. Phusion U способна как встраивать урациловый остаток, так и считывать его в ДНК-матрице.
Помимо этого, Phusion U обладает всеми характеристиками ДНК-полимераз Phusion – точностью, скоростью, способностью синтезировать длинные последовательности (до 20 тыс. п.н.). Частота ошибок у полимеразы Phusion U в 25 раз ниже, чем у стандартной
Taq ДНК-полимеразы. Встроенная функция горячего старта реализуется благодаря комбинации фермента со специфическим лигандом Affibody, ингибирующим полимеразную и 3’→5’ экзонуклеазную активности при комнатной температуре.
Эти особенности делают ДНК-полимеразу Phusion U оптимальным ферментом для амплификации повреждённой ДНК, ДНК после бисульфитной конверсии, а также для постановки ПЦР со сниженным риском контаминации.
ДНК-полимераза Phusion U Hot Start синтезирует ПЦР-продукты с тупыми концами.
ДНК-полимераза Phusion U Hot Start также доступна в формате Green и в составе мастер-микса – готовой 2-кратной смеси для ПЦР.
Условия хранения - 20 °С.
Особенности наборов Phusion U Hot Start:
- высокая точность синтеза (в 25 раз выше по сравнению с Taq);
- способность встраивать в ДНК дУТФ и использовать урацил-содержащие последовательности ДНК в качестве матрицы;
- отсутствие неспецифического синтеза и деградации праймеров в процессе подготовки ПЦР;
- высокая скорость синтеза – 1 тыс. п.н. за 15-30 секунд.
Области применения:
- амплификация ДНК после бисульфитной конверсии;
- амплификация повреждённой или деградированной ДНК;
- ПЦР с минимальным риском контаминации посторонними ПЦР-продуктами;
- методы клонирования на основе вырезания урациловых остатков (USER).
В состав набора входят:
- ДНК-полимераза Phusion U Hot Start (2 Ед/мкл);
- 5Х буфер Phusion HF*;
- 5Х буфер Phusion GC*;
- ДМСО.
* в состав 5Х буферов Phusion уже входит 7,5 мМ MgCl₂.